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PCR即聚合酶链式反应,是分子生物学研究和实验的常规方法,也是生物学、医学临床等领域广泛应用的实验技术。其特点是能将微量的DNA大幅增加。PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,四区域分别为:试剂配制区、样品处理区、核酸扩增区、产物分析区。
PCR实验室设计
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎。
①分散形式PCR实验室:所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCRclass="wpcom_keyword_link"实验室建设设计,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
②组合形式PCR实验室:所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室的建设设计,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
在PCR实验中所产生的DNA与RNA片段污染是一直以来PCR实验的重点问题。此类污染主要至上次试验中所产生的基因片段对下次试验产生的污染,而且一旦试验环境中的污染形成后很难处理。因为消毒等传统方式对于基因污染没有很良好的效果。所以在PCRclass="wpcom_keyword_link"实验室设计中一般将整套实验室设计为全新风型实验室,这样而已通过有效的换气次数来达到净化室内污染的作用。
而在控制方面也有很多不同之处,因为各单位对PCR实验的重视程度各有不同,所以在设计上也有不同,主要的控制设计有定送定排式压力控制系统、变送定排式压力控制系统变送变排式压力控制系统。在控制设备方面也有很多区分如压力无关型控制系统、压力有关型控制系统。
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PCR实验室又称为基因扩增实验室,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。
PCR实验室设计
一、PCR实验室基本结构
PCR实验室基本由四大结构组成,常见为:试剂准备区、制备区、扩增区和扩增分析区。
二、基本功能介绍:
1、准备区:主要进行实验所需试剂的准备工作,分装等,由传递窗运送至制备区,严禁走人员通道。
2、制备区:主要进行样品等保存,DNA/RNA的提取、贮存和其加入至扩增反应管和测定DNA/RNA的合成。
3、扩增区:主要进行DNA的扩增,已制备的DNA模版和合成的cDNA的加入和主板反应混合液制备成反应混合液等也可在扩增区内进行,在巢式PCR测定中,通常在首次扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高等污染危害性,二次加样必须在本区完成。
4、扩增分析:主要用来做扩增产物的测定,本区是主要的扩增产物污染来源,因此必须主意避免通过本区的物品或者工作服将扩增产物带出。
三、PCR实验室的走廊、传递窗设计常识
1. PCR走廊:并不是标配,进深不够时不要做PCR走廊,且PCR走廊会增加交叉污染。
这4个分区(试剂储存和准备区、标本制备区、核算扩增区、产物分析区)原本就不需连接在一起。且在物理空间上必须是完全相互独立的,各区域无论在空间上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态,不能有空气的直接相通。
2. 传递窗:并非必须设置(只要不涉及洁/污分流就不需要设置传递窗),但一般实验机构/实验人员喜欢设置。
传递窗的本质同缓冲间,是物流的缓冲间。在PCRclass="wpcom_keyword_link"实验室设计中,试剂准备和标本制备间是重点保护的区域,此处最好不要加传递窗,防止交叉污染。实验中的污染风险主要来自于核酸扩增时的加样行为,但由于操作在生物安全柜内进行,且确保空气不外溢,因此不存在污染。
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